Как исправить ошибку ПЦР в реальном времени 7500 Fix

Как исправить ошибку ПЦР в реальном времени 7500 Fix

Ваш компьютер работает медленно, часто дает сбои или просто не работает? Тогда вам нужно Reimage!

Сегодняшние рекомендации призваны помочь вам в случае возникновения ошибки устранения неполадок ПЦР в реальном времени 7500.

Устранение неполадок ПЦР в реальном времени 7500

Глава о. Генерация данных с дисков RQ — Rapid System 7500

Устранение неполадок

Applied Biosystems 7300/7500/7500 Руководство по быстрой количественной оценке ПЦР в реальном времени

Используйте от 10 до 100 мг матрицы кДНК на 20 мкл реакционной смеси.

Для достижения наилучших результатов запускайте эту панель взаимодействия как можно скорее

Вы можете заполнить его и получить за 7500 Fast you must on

Для достижения наилучших результатов диспергируйте реакционную смесь на пластине как можно дольше

Вы можете загрузить и запустить его благодаря инструменту 7500 Fast.

Убедитесь, что основной режим термоциклера установлен на Быстрый (см.

Выберите краситель ROX главным образом потому, что эталон пассивен во время настройки

Универсальное решение для всех проблем, связанных с Windows

Появляется ли у вас синий экран смерти? Restoro решит все эти проблемы и многое другое. Программное обеспечение, которое позволяет устранять широкий спектр проблем и проблем, связанных с Windows. Он может легко и быстро распознавать любые ошибки Windows (включая ужасный синий экран смерти) и предпринимать соответствующие шаги для решения этих проблем. Приложение также обнаружит файлы и приложения, в которых часто происходят сбои, что позволит вам исправить их проблемы одним щелчком мыши.

  • 1. Скачайте и установите Reimage
  • 2. Запустите приложение и нажмите "Поиск проблем"
  • 3. Нажмите кнопку "Исправить все проблемы", чтобы начать процесс восстановления.

  • Выбрать ROX в качестве пассивного эталона на каком-то этапе настройки

    Разработайте отличный протокол для восстановления после ошибок ПЦР или ОТ-ПЦР

    Возможные источники ошибок и/или проблем Ошибка оператора

    Есть много возможностей для провала бизнеса. I Поставщики этих ошибок часто, возможно, не идентифицированы. Первое, о чем нужно подумать при устранении неполадок любой процедуры, — это просмотреть протокол и повторить очень точный эксперимент. Важно — ознакомьтесь со стандартным протоколом (см. Приложение А, Протоколы к этому руководству по среде) и обратитесь к опытному молекулярному биологу для подтверждения эксперимента. Предостерегающий рассказ о постдоке, который провел несколько неумелых тестов ПЦР, ранее осознавших, что все dNTP отсутствуют в экспертной смеси ПЦР, является напоминанием о том, что даже каждый из наших лучших переутомленных ученых часто беспомощен против простых ошибок.

    Основной микс

    Сбои или проблемы со здоровьем и самочувствием при использовании мастер-микса на реактивных компонентах могут быть вызваны катастрофическим отказом наддува со всеми образцами и агрессивными контролями. Перед повторением эксперимента проверьте все гаджеты и их концентрации. Если используется только определенная новая партия реагентов, полезно подойти к новой со старой до сих пор, начав серию опытов.

    Считается важным учитывать при переключении между продуктами Wizard Mix, которые гарантируют сильные стороны, связанные с птеростильбеном. чувствительны к буферу/температуре тела отжига (Ta) комбинациям состава/количества праймера. Изменение одного из этих результатов может указать путь к другим способностям. Поэтому дважды проверяйте каждую из дозировок в смешанных мастер-комбинациях и на всех конкретных инструментах, прежде чем вносить радикальные изменения. Кроме того, важно внимательно прочитать прямые инструкции, которые прилагаются к каждой смеси, поскольку в них подробно описаны поддерживаемые заболевания, оптимизированные для фермента, обычно буфера механизма горячего запуска и этих компонентов.

    Прекрасной научной лабораторной практикой является подготовка конкретного мастер-микса, достаточно важного для того, чтобы все образцы были использованы. Убедитесь, что все компоненты полностью разморожены и хорошо перемешаны, чтобы мастер-микс, связанный с экспериментом, был действительно лучше перемешан, прежде чем он будет разделен на аликвоты в соответствии с образцами. Это особенно важно для обнаружения некоторых двойных буферов, таких как KiCqStart®, которые были более липкими, чем обычные буферы для ПЦР.

    оптимизация oligo

    Oligo может вызвать проблемы у людей; B. Неправильная или ошибочно разработанная последовательность, работа с неоптимальными дипломами, субоптимальным Ta, неправильная маркировка или отсутствие (для зондов). Анализ, выполненный только в субоптимальных условиях для вашего олиго или с использованием плохого стиля и дизайна, может предоставить вам данные, но он может не учитывать реальную область биологии глубоко. При получении продукта, содержащего лиофилизированные олигонуклеотиды, считается необходимым следующее:

    <ол>

  • Проверить заказ
  • Перед использованием убедитесь, что вся ДНК действительно ресуспендирована.
  • Подтвердите, что вариант имеет ожидаемую концентрацию
  • Ресуспендируйте определенные олигонуклеотиды путем нагревания олигонуклеотидов до 90°C в течение 5 минут, а затем хорошо перемешайте. Повторяющиеся циклы замораживания-оттаивания также могут влиять на характеристики олигонуклеотидов, кроме того, все олигонуклеотиды в концентрации частиц (обычно 100 мкМ) должны быть разделены на аликвоты и храниться при температуре -20°C или -80°C в течение длительного времени. р>

    На некоторых этапах устранения неполадок очень важно убедиться, что фактическая последовательность была упорядочена, без проблем вернувшись к целевой последовательности и просто подтвердив, какие олигопоследовательности на самом деле являются самыми последними. Убедитесь, что обычно oligo был очень хорошим, связавшись со всеми дилерами oligo. Измерьте рабочую централизацию ваших текущих олигомеров и изобразите флуоресцентные соединения, чтобы убедиться, что они несомненно классифицированы. Праймеры для анализа тестовых зондов в отношении SYBR® Green I Quantity PCR combo для проверки амплификации. Рассмотрите концентрацию праймера тонкой интонации или Ta (см. Проверка оптимизации анализа) и. При использовании действительно другого датчика в первый раз соберите данные флуоресценции для как можно большего количества тысяч длин волн, чтобы можно было лично увидеть любую потенциальную потерю сигнала между этими основными потоками и определить очевидные ошибки.

    Неадекватная оптимизация ПЦР

    Эффект пробной оптимизации выражается в постоянной оптимизации и проверке. Если анализ не работает или проходит неоптимально, но при этом нет ошибок при проектировании или рабочих процедурах по этому вопросу, он может отклоняться за счет оптимизации экспериментальных вопросов. При устранении неполадок тестируйте праймеры с фактической конечной концентрацией 100 нМ, 5 нМ и 900 нМ и/или Ta между двумя секундами при 55 °C, которая может достигать 70 °C (с использованием этого температурного градиента). . чтобы увидеть, будет ли пробная версия развиваться с более глубокой оптимизацией.

    Дизайн тестов RT-PCR и QPCR

    Схема анализа может быть описана в разделе Схема анализа ПЦР/кПЦР/кПЦР. При устранении неполадок в тесте убедитесь, что этот дизайн проверен. Подтвердите, что новый праймер PCR/qPCR, связанный с рангом ампликона, соответствует для начинающих в моем протоколе RT. Для демонстрации обратите внимание, что анализы, применяемые так, чтобы это была кДНК, если они выполняются после олиго-dT праймирования, рекомендуется быть ближе к этому 3′-концу транскрипта. Укажите, что концепция последовательности верна, и, кроме того, учитываются соответствующие варианты соединения с SNP.

    7500 устранение неполадок PCR с абсолютным временем

    Получите Reimage и почините свой компьютер менее чем за 5 минут. Скачать сейчас.

    г.

    Russian