Como Corrigir O Erro 7500 De PCR Em Tempo Real

Como Corrigir O Erro 7500 De PCR Em Tempo Real

Seu computador fica lento, trava com frequência ou simplesmente não funciona tão bem? Então você precisa de Reimage!

O livro de hoje foi desenvolvido para ajudar a maioria das pessoas quando você receber o erro de solução de problemas do PCR 7500 em tempo real.

7500 real time pcr troubleshooting

Capítulo 20. Gerando dados de discos RQ – Rapid System 7500

Solução de problemas

Guia do sistema de PCR em tempo real de quantificação rápida Applied Biosystems 7300/7500/7500

Use 10 a 100 miligramas de modelo de cDNA por 10 µl de mistura de reação.

Para obter melhores resultados, inicie a barra de interação o mais rápido possível

Você pode preenchê-lo enquanto o executa com 7500 Fast normalmente ativado

Para melhores resultados, disperse a mistura de respostas no prato o mais possível

Você pode baixar e executar o dispositivo com a ferramenta 7500 Fast.

Certifique-se de que o modo termociclador foi criado para Rápido (consulte

Escolha os corantes de absorção ROX, pois a referência é passiva sempre que você for ajustado

A solução única para todos os seus problemas relacionados ao Windows

Você está recebendo a Tela Azul da Morte? Restoro irá corrigir todos esses problemas e muito mais. Um software que permite corrigir uma ampla variedade de problemas e problemas relacionados ao Windows. Ele pode reconhecer com facilidade e rapidez quaisquer erros do Windows (incluindo a temida Tela Azul da Morte) e tomar as medidas apropriadas para resolver esses problemas. O aplicativo também detectará arquivos e aplicativos que estão travando com frequência, permitindo que você corrija seus problemas com um único clique.

  • 1. Baixe e instale o Reimage
  • 2. Inicie o aplicativo e clique em "Procurar problemas"
  • 3. Clique no botão "Corrigir todos os problemas" para iniciar o processo de reparo

  • Selecione ROX como fonte passiva durante a configuração

    Desenvolva um ótimo protocolo para recuperação de erros de PCR ou RT-PCR

    Possíveis fontes de erros e/ou problemas Erro do operador

    Quase todas as oportunidades para o fracasso dos negócios. ■ As fontes desses erros quase sempre não são identificadas. A primeira coisa a considerar ao solucionar qualquer procedimento é definitivamente revisar o protocolo e realizar o experimento exato. É importante se familiarizar com a dieta (consulte o Apêndice A, Protocolos deste importante guia de situação) e entrar em contato com um biólogo molecular conhecido para validar a brincadeira. O conto preventivo de um pós-doutorado adequado que executou várias amostras de PCR estragadas antes de perceber que todos os dNTPs exatos estavam faltando na mistura de PCR especializada é um lembrete de que os melhores cientistas sobrecarregados são em geral indefesos contra erros simples.

    Mistura principal

    Falhas possivelmente problemas de saúde ao usar a mistura especializada em componentes reativos podem acabar contribuindo para o aumento catastrófico da incapacidade em todas as amostras e pneus agressivos. Antes de repetir o experimento, verifique cada um dos componentes e suas concentrações. Se apenas um novo lote de reagentes provavelmente estiver sendo usado, é útil que você possa comparar o novo com o maduro antes de iniciar uma série de relatórios.

    É importante considerar o tempo de troca entre os produtos Wizard Mix em relação a determinados fortes. Os lados realmente estão associados ao pterostilbeno. sensível em relação às combinações de composição/quantidade de primer de tinta (Ta) de temperatura de recozimento (Ta). Alterar um desses resultados poderá levar a outras habilidades. Portanto, verifique novamente todas as dosagens nas mixagens conhecidas e em todos os instrumentos de corda específicos antes de fazer mudanças drásticas. Tornou-se também importante ler atentamente as instruções básicas que acompanham todo o master mix, pois detalham nossas próprias doenças recomendadas otimizadas para a molécula, o buffer do mecanismo de inicialização a quente, além dos componentes em questão.

    Muitas vezes, é uma boa prática de laboratório científico preparar uma mixagem mestre que seja bastante influente para que todas as amostras sejam realmente compartilhadas. Certifique-se de que todas as áreas podem ser completamente descongeladas e bem compostas, de modo que a equação principal do experimento seja realmente bem misturada antes de certamente ser aliquotada nas amostras. Isso é extremamente verdadeiro para a detecção de buffers 2x individuais, como KiCqStart®, que sempre são mais aderentes do que os buffers de PCR normais.

    Otimização de oligo

    Oligo pode estimular problemas quando as pessoas; B. Sequência incorreta ou alternativamente projetada incorretamente, executada em níveis sub-ótimos, Ta sub-ótimo, rotulado erroneamente como em branco (para sondas). Uma análise realizada em condições sub-ótimas para o seu oligo, também usando estilo e design ruins, poderá fornecer dados, mas definitivamente pode não refletir o campo real do campo da biologia em consideração. Ao obter uma marca contaminada com oligonucleotídeos liofilizados, é necessário o seguinte:

    1. Verificar pedido
    2. Certifique-se de que todo o DNA foi ressuspenso antes de usar.
    3. Confirme se a solução mais importante tem a concentração esperada

    Ressuspender meus oligonucleotídeos aquecendo os oligonucleotídeos para ajudá-lo a 90 ° C por 5 minutos e, no entanto, misturando bem. Ciclos repetidos de congelamento-descongelamento também podem afetar o desempenho dos oligonucleotídeos e, além disso, todos os oligonucleotídeos provenientes de concentrações do produto (geralmente 100 µM) devem ser aliquotados e armazenados a -20°C ou -80°C por um por um tempo prolongado. p>

    É muito importante, especialmente durante a etapa de solução de problemas, verificar quando a sequência real foi ordenada basicamente revertendo com sucesso para o arquipélago de destino e confirmando quais oligossequências são, acredite ou não, as mais recentes. Certifique-se de que cada oligo foi muito bom zumbindo o revendedor de oligo. Meça a concentração de emprego de seus oligômeros atuais combinados com compostos fluorescentes visuais para garantir que os clientes sejam classificados. Teste os primers de análise da sonda em SYBR® Green I quant PCR mix para verificar a amplificação. Considere a concentração de primer de ajuste de alta qualidade ou Ta (consulte Validação de otimização de ensaio) e. Ao tentar uma sonda diferente pela primeira vez, colete dados de fluorescência para o maior número possível de comprimentos de onda, para que quase qualquer perda potencial de valor entre o fluxo principal possa ser observada e erros óbvios possam ser detectados.

    Otimização de PCR inadequada

    O efeito da otimização do teste sempre foi descrito e demonstrado na otimização e verificação do teste. Se todos os ensaios não funcionarem ou funcionarem abaixo do ideal, mas não houver erros no projeto ou nas opções de tratamento operacional para esse assunto, isso pode variar da otimização das condições do teste. Ao solucionar problemas, teste os primers com uma concentração final de 300 nM, 500 nM e 900 nM e/ou Ta entre dois segundos perto de 55°C a 70°C (usando este gradiente quente). para ver se o teste realmente melhora com uma otimização mais profunda.

    Projeto de teste de RT-PCR e QPCR

    O desenvolvimento do ensaio é descrito em PCR/qPCR/qPCR Assay Design. Ao solucionar problemas de um teste, confirme se o design foi validado. Confirme o primer de PCR/qPCR associado a essa posição das correspondências de amplicon, eu diria que o primer no meu protocolo de RT. Por exemplo, observe que os ensaios aplicados para auxiliá-lo no cDNA, se realizados após a iniciação com oligo dT, devem estar mais próximos de cada uma das extremidades 3′ da transcrição. Certifique-se de que o conceito de sequência seja raquete e que as opções de conexão e SNPs apropriados sejam considerados.

    7500 solução de problemas de pcr em tempo real

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