Jak Naprawić Błąd Real Time PCR 7500 Fix

Jak Naprawić Błąd Real Time PCR 7500 Fix

Czy Twój komputer działa wolno, często ulega awarii lub po prostu nie działa tak dobrze? W takim razie potrzebujesz Reimage!

Dzisiejszy przewodnik zostanie zaprojektowany, aby pomóc, gdy użytkownicy otrzymają błąd rozwiązywania problemów w czasie rzeczywistym PCR 7500.

Rozwiązywanie problemów z 7500 normal time pcr

Rozdział 20. Generowanie danych z dysków RQ — Rapid System 7500

Rozwiązywanie problemów

Applied Biosystems 7300/7500/7500 Przewodnik po systemie Quick Quantitation Real Time PCR

Użyj 10 do 100 mg w celu uzyskania matrycy cDNA na 20 µl mieszanki emocji.

Aby uzyskać najlepsze wyniki, jak najszybciej uruchom pasek relacji

Możesz również wypełnić i uruchomić koncepcję z 7500 Fast zawsze włączonym

Aby uzyskać niewiarygodnie najlepsze wyniki, rozprowadź mieszaninę reakcyjną, gdy płytka jest jak najdłuższa

Możesz go ewentualnie pobrać i uruchomić za pomocą naszego własnego narzędzia 7500 Fast.

Upewnij się, że tryb arktycznego cyklera jest ustawiony na Szybki (patrz

Wybierz barwnik ROX, ponieważ obecnie odniesienie jest pasywne po dostosowaniu

Jednorazowe rozwiązanie wszystkich problemów związanych z systemem Windows

Czy otrzymujesz niebieski ekran śmierci? Restoro naprawi wszystkie te problemy i nie tylko. Oprogramowanie, które umożliwia naprawienie szerokiego zakresu problemów i problemów związanych z systemem Windows. Może łatwo i szybko rozpoznać wszelkie błędy systemu Windows (w tym przerażający niebieski ekran śmierci) i podjąć odpowiednie kroki w celu rozwiązania tych problemów. Aplikacja wykryje również pliki i aplikacje, które często ulegają awariom, umożliwiając naprawienie ich problemów jednym kliknięciem.

  • 1. Pobierz i zainstaluj Reimage
  • 2. Uruchom aplikację i kliknij „Skanuj w poszukiwaniu problemów”
  • 3. Kliknij przycisk „Napraw wszystkie problemy”, aby rozpocząć proces naprawy

  • Wybierz ROX jako pasywne odniesienie podczas konfiguracji

    Opracuj świetny protokół odzyskiwania po błędach PCR lub RT-PCR

    Możliwe źródła błędów i/lub problemów Błąd operatora

    Istnieje wiele możliwości przeciwdziałania niepowodzeniom biznesowym. I Źródła z tymi błędami często nie są zlokalizowane. Pierwszą rzeczą, którą należy wziąć pod uwagę podczas rozwiązywania problemów z jakąkolwiek procedurą, jest przeanalizowanie protokołu i powtórzenie określonego eksperymentu. Ważne jest, aby zapoznać się z protokołem (patrz Dodatek A, Protokoły do ​​tego przewodnika po stosunkach) i skontaktować się z doświadczonym biologiem molekularnym, aby pomóc w walidacji eksperymentu. Przestrzenna opowieść o doktorze, który przeszedł kilka nieudanych testów PCR przed ustaleniem, czy wszystkie dNTPs były pozbawione eksperckiej mieszanki PCR, może być przypomnieniem, że nawet bardzo przepracowani naukowcy są często bezbronni, jeśli chodzi o powstrzymanie prostych błędów.

    Mieszanka główna

    Niepowodzenia lub problemy zdrowotne podczas używania mieszanki głównej przez składniki reaktywne mogą być spowodowane katastrofalną awarią doładowania w próbkach i agresywnych kontrolach. Przed powtórzeniem eksperymentu sprawdź wszystkie składniki oprócz ich stężeń. Jeśli używana jest tylko jedna zamienna partia odczynników, przed rozpoczęciem serii eksperymentów przydatne jest zwykle porównanie nowego ze starym.

    Zwykle ważne jest, aby przy dołączaniu do produktów Wizard Mix wziąć pod uwagę, że pewne bezpieczne strony są powiązane, mając pterostilbene. wrażliwe na bufor/wilgoć wyżarzania (Ta) kombinacje składu/ilości podkładu. Zmiana kogoś z tych wyników może prowadzić do powrotu do innych umiejętności. Dlatego przed wprowadzeniem drastycznych zmian sprawdź dwukrotnie wszystkie poziomy w przemiksowanych miksach głównych lub na wszystkich określonych instrumentach. Interesujące jest również uważne przeczytanie podstawowych instrukcji dołączonych do każdego dopasowania wzorca, ponieważ szczegółowo opisują one zalecaną chorobę zoptymalizowaną pod kątem enzymu, bufor mechanizmu gorącego startu i rzeczy, o których mowa.

    Dobrą, kontrolowaną praktyką laboratoryjną jest przygotowanie mieszanki Excela, która ma wystarczająco duży wpływ, aby wszystkie próbki były wspólne. Upewnij się, że wszystkie składniki można nieco dokładniej rozmrozić i dobrze wymieszać, dzięki czemu mieszanka wzorcowa konkretnego eksperymentu jest rzeczywiście bardzo dobrze skomponowana, zanim zostanie podzielona na niektóre próbki. Odnosi się to szczególnie do wykrywania niektórych dwukrotnie buforów, takich jak KiCqStart®, które są bardziej lepkie niż zwykłe bufory PCR.

    Optymalizacja oligo

    Oligo może powodować problemy, kiedy ludzie; B. Nieprawidłowa lub niepoprawnie wykonana sekwencja, uruchom na suboptymalnych poziomach, suboptymalnym Ta, źle oznakowane lub puste (dla sond). Analiza przeprowadzona w nieoptymalnych warunkach medycznych dla twojego oligonukleotydu lub przy użyciu przeciętnego stylu i projektu może dostarczyć dokumentów, ale może nie odzwierciedlać mojej rzeczywistej dziedziny biologii na kontach. Podczas uzyskiwania produktu zanieczyszczonego liofilizowanymi oligonukleotydami, naprawdę wymagane są następujące elementy:

    1. Sprawdź zamówienie
    2. Upewnij się, że całe DNA powinno zostać ponownie zawieszone przed użyciem.
    3. Potwierdź, że roztwór ma również oczekiwane stężenie

    Ponownie zawiesić oligonukleotydy, a także podgrzać oligonukleotydy do 90°C przez 5 minut, a następnie prawidłowo wymieszać. Powtarzane cykle zamrażania-rozmrażania mogą również powodować problemy z wydajnością oligonukleotydów, a podczas dodawania wszystkie oligonukleotydy na poziomie produktu (zwykle 100 µM) powinny być szczególnie podzielone i przechowywane przez długi czas w temperaturze -20°C lub -80°C. p>

    Uważa się, że na etapie rozwiązywania problemów bardzo ważne jest zweryfikowanie, czy właściwa sekwencja została uporządkowana poprzez pomyślne przejście do sekwencji docelowej i ekspozycję, które oligosekwencje są w rzeczywistości prawie niedawne. Upewnij się, że oligo są bardzo dobre, kontaktując się z dealerem oligo. Zmierz stężenie robocze obecnych oligomerów i wizualnych związków fluorescencyjnych, aby upewnić się, że są one brane pod uwagę. Startery testowe sondy testowej w mieszaninie SYBR® Green I quant PCR ułatwiające sprawdzenie amplifikacji. Rozważ dostrojenie stężenia podkładu lakierniczego lub Ta (zobacz Walidacja Optymalizacji Testu) i. Używając wielu sond po raz pierwszy, weź dane fluorescencji dla jak największej liczby długości fal, aby można było zaobserwować prawie nową potencjalną utratę sygnału, pomiędzy którymi można zaobserwować główny strumień, a ponadto można było wykryć oczywiste błędy.

    Nieodpowiednia optymalizacja PCR

    Wyobraża się, że wpływ optymalizacji próbnej jest demonstrowany poprzez ulepszanie i weryfikację próbną. Jeśli test nie działa lub działa nieoptymalnie, pomimo faktu, że nie ma błędów, w których projekt lub procedury operacyjne mają takie znaczenie, może odbiegać od optymalizacji warunków eksperymentalnych. Podczas rozwiązywania problemów testuj startery w ostatecznym stężeniu 100 nM, 200 nM i 900 nM i/lub Ta w ciągu dwóch sekund w temperaturze 55°C, aby umożliwić im osiągnięcie temperatury 70°C (przy użyciu tej temperatury gradient). aby zacząć sprawdzać, czy okres próbny poprawi cierpienie z powodu głębszej optymalizacji.

    Projekt testu RT-PCR i QPCR

    Projektowanie testu jest wspomniane w Projektowaniu testu PCR/qPCR/qPCR. Podczas rozwiązywania problemów z testem upewnij się, że wzór został zweryfikowany. Potwierdź, że starter PCR/qPCR powiązany z pozycją, w tym amplikonem, pasuje do startera w moim protokole RT. Na przykład, zaobserwuj, że testy zastosowane do cDNA, niezależnie od tego, czy są wykonywane po napiętnowaniu oligo dT, powinny z pewnością być bliżej odcinka 3′ końca transkryptu. Upewnij się, że koncepcja sekwencji jest poprawna i że uwzględnionych jest wiele odpowiednich opcji połączeń i SNP.

    7500 rozwiązywania problemów w czasie rzeczywistym z pcr

    Zdobądź Reimage i napraw komputer w mniej niż 5 minut. Pobierz teraz.

    Polish