Repareren Van Realtime PCR-fout 7500 Repareren

Repareren Van Realtime PCR-fout 7500 Repareren

Werkt uw computer traag, crasht hij vaak of presteert hij gewoon niet zo goed? Dan heb je Reimage nodig!

De hulp van vandaag is ontworpen om u te helpen terwijl u de Real-time PCR 7500-foutopsporing ontvangt.

7500 realtime pcr-probleemoplossing

Hoofdstuk 24. Gegevens genereren van RQ-schijven – Rapid System 7500

Problemen oplossen

Applied Biosystems 7300/7500/7500 Snelle kwantificering realtime PCR-systeemgids

Gebruik 10 tot 100 mg met betrekking tot cDNA-template per 20 µl met behulp van een reactiemengsel.

Start voor de beste resultaten een deel van de interactiebalk zo snel mogelijk

Je kunt het vullen en organiseren met 7500 Fast, vaak op

Voor de beste resultaten verspreidt u het reactiepaar zo lang mogelijk op de plaat

Soms kunt u het downloaden en uitvoeren voor de 7500 Fast-tool.

Zorg ervoor dat de thermische cycler-modus is ingesteld die Fast zal helpen (zie

Kies de ROX-kleurstof aangezien de referentie passief is omdat aangepast

De totaaloplossing voor al uw Windows-gerelateerde problemen

Krijg je het Blue Screen of Death? Restoro lost al deze problemen en meer op. Een software waarmee u een breed scala aan Windows-gerelateerde problemen en problemen kunt oplossen. Het kan gemakkelijk en snel alle Windows-fouten herkennen (inclusief het gevreesde Blue Screen of Death) en passende stappen ondernemen om deze problemen op te lossen. De applicatie detecteert ook bestanden en applicaties die vaak crashen, zodat je hun problemen met een enkele klik kunt oplossen.

  • 1. Download en installeer Reimage
  • 2. Start de applicatie en klik op "Scannen op problemen"
  • 3. Klik op de knop "Alle problemen oplossen" om het reparatieproces te starten

  • Selecteer ROX als passieve referentie tijdens de installatie

    Ontwikkel een geweldig protocol voor het herstellen van PCR- of RT-PCR-fouten

    Mogelijke bronnen van fouten en/of problemen Operatorfout

    Er zijn veel mogelijke keuzes bij een faillissement. I De oorsprong van deze fouten wordt vaak niet altijd achterhaald. Het eerste waar u over na moet denken bij het oplossen van problemen met een procedure, is om het protocol te bekijken en uw huidige exacte experiment te herhalen. Het is belangrijk als u zich vertrouwd wilt maken met het standaardprotocol (zie Bijlage A, Protocollen bij deze gegeven situatiegids) en contact wilt opnemen met een bekwame moleculair bioloog om het experiment te valideren. Het waarschuwende verhaal van een postdoc die meestal verschillende verprutste PCR-tests uitvoerde voordat hij zich realiseerde dat alle dNTP’s ontbraken in de deskundige PCR-eenheid, herinnert eraan dat zelfs die best overwerkte wetenschappers vaak hulpeloos zijn tegen eenvoudige fouten.

    Hoofdmix

    Fouten of problemen bij het gebruik van de mastervariatie op reactieve componenten kunnen worden besproken door catastrofale boost-mislukkingen in alle monsters en agressieve controles. Controleer alle details en hun concentraties voordat u het experiment herhaalt. Als er slechts één nieuwe batch reagentia wordt gebruikt, is het nuttig om de nieuwe met de oude tot nu toe te beschouwen en een reeks experimenten te starten.

    Het is eigenlijk belangrijk om te overwegen bij het wisselen tussen Wizard Mix-producten die uniek sterk zijn. De zijkanten zijn verbonden met pterostilbeen. gevoelig voor buffer/annealing klimaat (Ta) combinaties van primer samenstelling/hoeveelheid. Het veranderen van een van deze uitkomsten kan leiden tot andere vaardigheden. Controleer daarom elke dosering in de overgemengde mastermengsels en op alle specifieke instrumenten voordat u drastische wijzigingen aanbrengt. Het is daarnaast belangrijk om de belangrijke instructies die bij elke informatie over mix worden geleverd, zorgvuldig te lezen, aangezien ze de voorgestelde ziekten beschrijven die zijn geoptimaliseerd voor het enzym, momenteel de buffer voor het warme startmechanisme, en welke de componenten in kwestie.

    Het is een solide wetenschappelijke laboratoriumpraktijk om elke soort mastermix te bereiden die voldoende significant is zodat alle monsters samengevoegd zijn. Zorg ervoor dat alle componenten grondig ontdooid en gemakkelijk gemengd moeten worden, zodat de mastermix van het experiment inderdaad heel fijn gemengd is voordat deze door de monsters wordt verdeeld. Dit is vooral specifiek voor de detectie van zo’n 2-voudige buffers, zoals KiCqStart®, die ongetwijfeld plakkeriger zijn dan gewone PCR-buffers.

    oligo-optimalisatie

    Oligo kan zorgen veroorzaken wanneer mensen; B. Onjuiste of onvoldoende ontworpen sequentie, uitgevoerd met suboptimale instellingen, suboptimale Ta, verkeerd gelabeld of blanco (voor sondes). Een analyse die wordt uitgevoerd onder de suboptimale omstandigheden voor uw oligo, of een slechte stijl en ontwerp aanschaft, kan gegevens opleveren, maar het is mogelijk dat deze tijdens het onderzoek niet het werkelijke vakgebied van de biologie imiteert. Bij het verkrijgen van een product dat is beschadigd met gevriesdroogde oligonucleotiden, was het volgende echt vereist:

    1. Bestelling controleren
    2. Zorg ervoor dat al het DNA vóór gebruik opnieuw kan worden gesuspendeerd.
    3. Bevestig dat het pakket de verwachte concentratie heeft

    Hersuspendeer een oligonucleotide door de oligonucleotiden 5 minuten op 90°C te verwarmen en vervolgens goed te integreren. Herhaalde cycli van invriezen en ontdooien kunnen soms de prestatie van oligonucleotiden beïnvloeden, en bijgevolg moeten alle oligonucleotiden bij gebruiksconcentraties (meestal 100 µM) in porties worden verdeeld en gedurende een lange kostbare tijd bij -20°C of -80°C worden bewaard. p>

    Het is erg belangrijk tijdens alle stappen voor probleemoplossing om te controleren of de eigenlijke sequentie meestal op de juiste manier is geordend door terug te keren naar de doelsequentie en toch te bevestigen welke oligosequenties eigenlijk uw meest recente zijn. Zorg ervoor dat elke oligo erg goed was door contact op te nemen met de exacte oligo-dealer. Meet de werkfocus van uw huidige oligomeren en conceptuele fluorescerende verbindingen om er zeker van te zijn dat ze onbetwistbaar zijn geclassificeerd. Testprobe-assayprimers die SYBR® Green I kwantitatieve PCR dragen, worden samengevoegd om de amplificatie te controleren. Overweeg fijne accentueringsprimerconcentratie of Ta (zie Assay Optimization Validation) en. Als u voor het eerst een andere sonde gebruikt, verzamel dan fluorescentiegegevens voor zo veel mogelijk golflengten, zodat een groot deel van elk mogelijk signaalverlies van de hoofdstroom kan worden gecontroleerd en duidelijke fouten kunnen worden gedetecteerd.

    Ontoereikende PCR-optimalisatie

    Het effect van proefoptimalisatie wordt duidelijk aangetoond in procesoptimalisatie en verificatie. Als de analyse niet werkt of niet optimaal functioneert, maar er zijn hierdoor geen fouten in het ontwerp of de bedieningsprocedures, dan kan deze direct afwijken van de optimalisatie van de experimentele temperaturen. Bij het oplossen van problemen, test primers bij elke soort eindconcentratie van 100 nM, vijf nM en 900 nM en/of Ta tussen twee seconden bij 55°C om u te helpen tot 70°C (met behulp van deze temperatuurgradiënt). als u wilt zien of de proefperiode zal verbeteren met diepere optimalisatie.

    RT-PCR- en QPCR-testontwerp

    Assayontwerp is beschreven in PCR/qPCR/qPCR Assay Design. Zorg er bij het oplossen van problemen met een test voor dat elk van onze ontwerpen is gevalideerd. Bevestig dat elke PCR/qPCR-primer die is gekoppeld aan het punt van het amplicon overeenkomt met de federale overheid in mijn RT-protocol. Houd er bijvoorbeeld rekening mee dat assays die worden toegepast om u te helpen bij het cDNA, indien uitgevoerd na oligo-dT-priming, dichter bij het algemeen 3′-uiteinde van het transcript moeten zijn. Zorg ervoor dat het sequentieconcept klopt en dat daarna de juiste verbindingsopties naast de SNP’s worden overwogen.

    7500 tastbare tijd pcr-probleemoplossing

    Koop Reimage en repareer uw computer in minder dan 5 minuten. Download nu.

    Dutch