Comment Réparer L’erreur 7500 PCR En Temps Réel

Comment Réparer L’erreur 7500 PCR En Temps Réel

Votre ordinateur est-il lent, plante-t-il fréquemment ou ne fonctionne-t-il pas aussi bien ? Alors vous avez besoin de Reimage!

Les recommandations d’aujourd’hui sont conçues pour vous aider lorsque vous recevez l’erreur de dépannage PCR 7500 en temps réel.

Dépannage du pcr en temps réel 7500

Chapitre 20-30. Génération de données à partir de disques RQ – Rapid System 7500

Dépannage

Guide du système de PCR en temps réel de quantification rapide Applied Biosystems 7300/7500/7500

Utilisez 10 à 100 mg de matrice d’ADNc par 20 µl de mélange réactionnel.

Pour de meilleurs résultats, lancez je dirais la barre d’interaction dès que possible

Vous pouvez le remplir et le travailler avec 7500 Fast assurez-vous de

Pour de meilleurs résultats, dispersez le couple de réaction sur la plaque aussi longtemps que possible

Vous pouvez maintenant le télécharger et l’exécuter en plus de l’outil 7500 Fast.

Assurez-vous que le mode thermocycleur est généralement réglé – Rapide (voir

Choisissez le colorant ROX du fait que la référence est passive pendant le temps ajusté

La solution unique pour tous vos problèmes liés à Windows

Obtenez-vous l'écran bleu de la mort ? Restoro résoudra tous ces problèmes et plus encore. Un logiciel qui vous permet de résoudre un large éventail de problèmes et de problèmes liés à Windows. Il peut facilement et rapidement reconnaître toutes les erreurs Windows (y compris le redoutable écran bleu de la mort) et prendre les mesures appropriées pour résoudre ces problèmes. L'application détectera également les fichiers et les applications qui plantent fréquemment, vous permettant de résoudre leurs problèmes en un seul clic.

  • 1. Téléchargez et installez Reimage
  • 2. Lancez l'application et cliquez sur "Rechercher les problèmes"
  • 3. Cliquez sur le bouton "Résoudre tous les problèmes" pour démarrer le processus de réparation

  • Sélectionnez ROX comme référence passive lors de la configuration

    Développer un excellent protocole pour récupérer des erreurs PCR ou RT-PCR

    Sources possibles d’erreurs et/ou de problèmes Erreur de l’opérateur

    Il existe de nombreuses perspectives d’échec commercial. I Les fondements de ces erreurs ne sont souvent pas du tout identifiés. La première chose à vérifier lors du dépannage de toute procédure est de revoir le protocole et de répéter l’expérience exacte particulière. Il est important de se familiariser avec le projet (voir Annexe A, Protocoles de ce guide d’expérience) et de contacter un biologiste moléculaire reconnu pour valider l’expérience. Le récit édifiant d’un postdoc qui est capable d’exécuter plusieurs tests PCR ratés réalisant que tous les dNTP sont en fait absents du point de croix PCR expert est un rappel que même la plupart des meilleurs scientifiques surmenés sont souvent impuissants face à de simples erreurs.

    Mélange principal

    Les échecs ou les problèmes de santé lors de l’utilisation de la combinaison principale de composants réactifs peuvent être légués par un échec de boost catastrophique concernant tous les échantillons et les contrôles agressifs. Avant de répéter l’expérience, vérifiez tous les composés et leurs concentrations. Si seul un nouveau lot distinct de réactifs est actuellement utilisé, il est utile de comparer le nouveau avec l’ancien avant de commencer une série d’expériences.

    Il sera probablement important de considérer lors de la rotation entre les produits Wizard Mix que de nombreux côtés forts sont comparables au ptérostilbène. sensible aux combinaisons tampon/froid de recuit (Ta) de composition/quantité d’apprêt. Changer l’un de ces résultats peut vous guider vers d’autres capacités. Par conséquent, revérifiez beaucoup de dosages dans les fusibles maîtres surmélangés et sur tous les instruments spécifiques avant d’apporter des changements drastiques. En dehors de cela, il est important de lire attentivement les instructions simples fournies avec chaque mélange Excel car elles détaillent les maladies approuvées optimisées pour l’enzyme, le tampon du mécanisme de démarrage à chaud d’une personne et tous les composants en question.

    C’est une excellente pratique scientifique de laboratoire que de préparer chaque mélange maître suffisamment important pour que tous les échantillons soient également préparés. Assurez-vous que tous les composants seront soigneusement décongelés et mélangés efficacement, de sorte que le mélange maître derrière l’expérience soit en effet très très bien mélangé avant qu’il ne soit aliquoté dans les échantillons. Cela est particulièrement vrai pour la détection de certains tampons 2 fois, tels que KiCqStart®, qui sont probablement plus collants que les tampons PCR ordinaires.

    Optimisation des oligos

    Oligo peut causer des problèmes lorsque les gens ; B. Séquence incorrecte ou soudainement conçue, exécutée à des normes sous-optimales, Ta sous-optimale, mal étiquetée ou masquée (pour les sondes). Une analyse effectuée dans des conditions sous-optimales pour votre oligo, ou en utilisant un style et une conception médiocres, peut contenir des données, mais elle peut ne pas se concentrer sur le domaine biologique réel considéré. Lors de l’obtention d’un produit toxique avec des oligonucléotides lyophilisés, les éléments suivants sont considérés comme requis :

    1. Vérifier la commande
    2. Assurez-vous que tout l’ADN est remis en suspension avant utilisation.
    3. Confirmez que le meilleur a la concentration attendue

    Resuspendre un nouvel oligonucléotide en chauffant les oligonucléotides pour vous à 90 °C pendant 5 minutes, puis en mélangeant bien. Des cycles de congélation-décongélation répétés peuvent même affecter les performances des oligonucléotides, et en outre, tous les oligonucléotides aux concentrations de la méthode (généralement 100 µM) doivent être davantage aliquotés et stockés à -20°C ou -80°C pendant une longue seconde. p>

    Il est très important lors de l’étape de dépannage d’une personne de vérifier que la séquence réelle a souvent été ordonnée en revenant de manière sûre et efficace à la séquence cible combinée à la confirmation des oligoséquences qui sont en fait souvent les plus récentes. Assurez-vous que tout l’oligo était très bon en contactant comment le concessionnaire oligo. Mesurez le point focal de travail de vos oligomères et composés fluorescents de vision actuels pour vous assurer qu’ils peuvent être trouvés classés. Tester les amorces de dosage de la sonde dans le SYBR® Green I quant PCR fit pour vérifier l’amplification. Envisagez une concentration d’amorce d’accentuation fine ou Ta (voir Validation de l’optimisation du test) et. Lors de l’utilisation d’une sonde très différente pour le premier programme, collectez des données de fluorescence pour des longueurs d’onde aussi calmes que possible afin que presque toute perte potentielle de signal reliant le flux principal puisse être reconnue et que des erreurs évidentes puissent être observées.

    Optimisation PCR inadéquate

    L’effet de l’optimisation de la période d’essai est mentionné dans l’optimisation et la vérification de la période d’essai. Si l’analyse ne fonctionne pas ou est appropriée de manière sous-optimale, mais qu’il n’y a pas d’erreurs dans la conception ou les procédures d’exploitation pour le compte de cette question, elle peut dévier produite par l’optimisation des phrases expérimentales. Lors du dépannage, testez les amorces à une concentration finale de 100 nM, 700 nM et 900 nM et/ou Ta entre deux secondes à 55 °C pour aider à 70 °C (en utilisant ce gradient de température) . pour voir si l’essai progressera avec une optimisation plus approfondie.

    Conception des tests RT-PCR et QPCR

    La conception du test peut être décrite comme décrit dans Conception du test PCR/qPCR/qPCR. Lors du dépannage d’un test, assurez-vous que cette conception est validée. Confirmez que l’amorce PCR/qPCR la plus importante associée à la mise de l’amplicon correspond au 101 dans mon protocole RT. Pour la situation en question, notez que les dosages appliqués à l’ADNc, s’ils sont effectués après l’amorçage oligo dT, doivent de préférence être plus proches de l’ensemble de l’extrémité 3′ du transcrit. Assurez-vous que le concept de séquence est solide et que les options de connexion appropriées, puis les SNP, sont pris en compte.

    7500 temps total de dépannage pcr

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